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              生物3D打印構(gòu)建的仿生多層植入物有效促進皮膚傷口愈合

              科研前沿
              2023
              07/03
              17:28
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              來源: EngineeringForLife

              皮膚被認(rèn)為是抵御外部物理、化學(xué)和微生物攻擊的主要屏障。創(chuàng)傷、感染、燒傷和糖尿病是全層皮膚缺損的常見原因,修復(fù)此類缺損是一項重大的臨床挑戰(zhàn)。自體或同種異體皮膚移植是應(yīng)對這一挑戰(zhàn)的理想選擇,但仍存在供體不足和免疫排斥反應(yīng)問題。

              活細(xì)胞和生物材料的生物3D打印是解決這一挑戰(zhàn)的一項有前景的技術(shù)。然而,生物材料的制備耗時且來源有限是必須解決的瓶頸。針對此問題,來自解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心燒傷整形醫(yī)學(xué)部的陳敏亮醫(yī)師開發(fā)了一種簡單快速的方法,將脂肪組織直接加工成微碎片脂肪細(xì)胞外基質(zhì)(mFAECM)作為生物墨水的主要成分,以制造生物打印的仿生多層植入物。通過mFAECM復(fù)合生物墨水和細(xì)胞制造的仿生多層植入物可以通過促進傷口內(nèi)新組織的收縮、膠原蛋白分泌和重塑以及新血管形成來加速傷口愈合。

              相關(guān)研究成果以“3D-Bioprinted Biomimetic Multilayer Implants Comprising Microfragmented Adipose Extracellular Matrix and Cells Improve Wound Healing in a Murine Model of Full-Thickness Skin Defects”為題于2023年6月14日發(fā)表在《ACS Appl. Mater. Interfaces》上。

              圖1 仿生多層植入物的3D打印、制造和植入示意圖

              1. mFAECM的制備和表征

              作者首先收集了均質(zhì)化的ECM,其具有均勻致密的絮狀外觀(圖2A)。在本研究中,使用三通連接器兩次均質(zhì)化ECM,通過改變?nèi)ㄩy角度以減小孔徑來進一步破碎ECM。為了能夠立即使用該材料,該研究沒有使用需要數(shù)十個小時才能完成的無細(xì)胞方法,因此ECM中發(fā)現(xiàn)了一些細(xì)胞核(圖2B)。作為一種可立即使用的自體材料,少量細(xì)胞的存在不會影響實用性。對mFAECM和天然組織關(guān)鍵成分的分析表明天然組織的大部分膠原蛋白和sGAG含量保留在mFAECM中。
              圖2 mFAECM 的制備和表征

              2. 流變及其結(jié)構(gòu)特性

              當(dāng)溫度低于22 ℃時,儲能模量和損耗模量的變化幅度突然增大。儲能模量在約19.8 °C時超過損耗模量,表明從液體轉(zhuǎn)變?yōu)槟z。與此同時,損耗角正切突然下降,也反映了從液體到固體的轉(zhuǎn)變(圖3A)。因此,作者選擇19−21 ℃作為打印溫度。在 0−30 °C范圍內(nèi),生物墨水粘度隨著溫度升高而降低(圖3B)。作者還在17和20 °C下通過穩(wěn)定剪切掃描分析了粘度,發(fā)現(xiàn)在兩個溫度下粘度隨著剪切速率的增加而降低,顯示出剪切稀化特性(圖3C)。SEM結(jié)果顯示復(fù)合生物墨水的多孔微觀結(jié)構(gòu),孔徑范圍為50至200μm,足以允許內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管生成(圖3D)。

              圖3 mFAECM-GelMA-HAMA 復(fù)合生物墨水的流變學(xué)和微觀結(jié)構(gòu)特性

              3. 仿生多層植入物的制造

              接著,為了創(chuàng)建可打印的mFAECM,作者將其與甲基丙烯酰明膠(GelMA)和甲基丙烯酰透明質(zhì)酸(HAMA)結(jié)合形成三種生物墨水。為了評估m(xù)FAECM復(fù)合生物墨水的可打印性,應(yīng)用3D打印技術(shù)來制造圓形、網(wǎng)狀四層結(jié)構(gòu),該構(gòu)造表現(xiàn)出高保真度,并且與設(shè)計模式高度一致(圖4A-B)。使用連接到打印機的高清相機拍攝的圖像顯示,生物墨水軌跡保持連續(xù),并且每條線獨立分布,沒有合并或折疊(圖4C)。SEM圖像顯示細(xì)胞附著在孔上(圖4D),例如結(jié)構(gòu)下層的孔。總之,mFAECM復(fù)合生物墨水表現(xiàn)出良好的可打印性和保真度,可以支持細(xì)胞附著。

              圖4 仿生多層植入物的制造和微觀結(jié)構(gòu)

              4. 體外生物相容性
              為了評估m(xù)FAECM復(fù)合生物墨水和光引發(fā)劑的生物相容性,將 HaCaT、成纖維細(xì)胞和HUVEC分別封裝在復(fù)合生物墨水中并在單層印刷結(jié)構(gòu)中培養(yǎng)。所有細(xì)胞類型從第1天到第7天均增殖(圖 5A),并且活力保持 > 90%(圖5B)??侱NA含量隨著時間的推移而增加,第1、3和7天之間存在顯著差異(圖5C)。這些結(jié)果表明mFAECM復(fù)合生物墨水具有良好的生物相容性,并且打印溫度和壓力不會對細(xì)胞活力產(chǎn)生不利影響。

              圖5 細(xì)胞相容性評價

              5. 仿生多層植入物促進小鼠模型中的皮膚傷口愈合

              為了評估由mFAECM和細(xì)胞組成的生物打印仿生多層植入物對體內(nèi)傷口愈合的效果,作者在裸鼠中制備了全層皮膚缺損模型(圖6A)。植入后的第14天,充滿細(xì)胞的組已實現(xiàn)傷口完全閉合,而無細(xì)胞組仍有一小片未愈合的傷口,空白組未愈合傷口較大(圖6A-D)。形態(tài)學(xué)分析表明,生物打印仿生多層植入物的傷口愈合效果最好。

              H&E染色用于評估愈合傷口區(qū)域的整體組成和解剖結(jié)構(gòu)。第14天的染色結(jié)果表明充滿細(xì)胞和無細(xì)胞組的表皮結(jié)構(gòu)更加完整。與脫細(xì)胞組相比,細(xì)胞負(fù)載組的真皮結(jié)構(gòu)分布更加均勻,血管和纖維組織清晰可見(圖6E)。

              圖6 動物皮膚傷口模型及HE染色分析

              綜上,本文描述了一種快速而簡單的方法來直接處理脂肪組織以獲得mFAECM,它將用作生物墨水的主要成分來制造生物3D打印的充滿細(xì)胞的仿生多層植入物。結(jié)果表明,mFAECM 復(fù)合生物墨水具有良好的生物相容性、可打印性和保真度,并且可以支持細(xì)胞粘附。植入物中封裝的細(xì)胞在植入后可以正常存活并參與傷口修復(fù)。植入物的基本結(jié)構(gòu)在整個傷口愈合過程中得到維持,并在后期逐漸代謝。這項研究為改善生物3D打印皮膚替代品的及時制造提供了一條有效的途徑,這對于大規(guī)模全層皮膚缺損至關(guān)重要。

              文章來源:https://doi.org/10.1021/acsami.2c21629


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